應(yīng)如何正確溶解重組蛋白產(chǎn)品？
第1步：開蓋前離心試劑管。凍干粉在運輸過程中可能會因顛簸而漂散并粘貼于管壁或管蓋上，所以在打開塑料瓶蓋前，需將凍干粉通過離心收集到管底，以便用很小體積的液體即可將凍干粉*溶解。一般需要3000-3500rpm離心5min，效果良好。
第2步：用無菌水重懸至0.1-1.0 mg/ml，不可振蕩。這個步驟即為溶解步驟，非常重要。
1) 一定要用推薦的溶液重懸(或溶解)凍干粉。蛋白的溶解性與很多因素有關(guān)，其中比較重要的是pH值和離子強度。產(chǎn)品說明上所標明的溶解液是能夠?qū)⒃摷毎蜃踊蛑亟M蛋白*溶解的液體。如果您所用的溶解液的pH值和離子強度與說明書中所標明的不符，很多時候會造成細胞因子或重組蛋白不能*溶解或者根本無法溶解，這樣所配得的細胞因子或重組蛋白必然活性不夠或喪失。
2) 一定要溶解到的濃度。蛋白在一定的濃度范圍內(nèi)可以保持良好的穩(wěn)定性，這個范圍就是說明書上所標明的濃度范圍，一般為0.1-1.0 mg/ml。但這一濃度范圍對于不同的重組蛋白是不同的。高于或低于該濃度范圍時細胞因子或蛋白會不穩(wěn)定，即很容易出現(xiàn)活性下降的現(xiàn)象。其次，高于這個濃度范圍，可能會超過該蛋白的大溶解濃度，即蛋白無法*溶解。再者，高于或低于該濃度范圍，蛋白可能會出現(xiàn)聚集(aggregation)，終結(jié)果還是部分蛋白未溶解，導(dǎo)致蛋白活性的減弱。
3) 一定不能振蕩(vortex)。這里所說的振蕩是指用渦旋儀進行快速振蕩。請用放至室溫的緩沖液作為溶劑。加緩沖液后，蓋好瓶塞，輕輕用手翻轉(zhuǎn)瓶子或把瓶子放在一個緩慢搖擺的搖床上。這樣做來保證緩沖液能夠接觸到瓶子的整個內(nèi)壁。 讓瓶子在室溫放置至少10 - 15分鐘，然后可以進行分裝或使用。
第3步：該重懸液在2-8℃長可保存1周。
用說明書上推薦的溶液將細胞因子或重組蛋白重懸到推薦的濃度后，細胞因子或重組蛋白可放置在2-8℃，即冰箱的冷藏室。在這種條件下，細胞因子或重組蛋白的活性長可保持1周。這對一個周期為5-7天的實驗，如DC(樹突狀細胞)的誘導(dǎo)成熟是足夠的。在此期間，只要每次從冰箱里吸取一定量的細胞因子或重組蛋白溶液加入到培養(yǎng)體系內(nèi)即可。
其實，說明書上推薦的濃度對于一般的實驗來講是比較高的。所以用戶通常會將該溶液進一步稀釋后再放在4℃保存，待1周內(nèi)用完。如進行稀釋，必須遵照下面第4步的方法，即需用含載體蛋白的溶液進行稀釋，否則稀釋后的細胞因子或重組蛋白很容易會粘附在管壁或瓶壁上，使得溶液中的細胞因子或重組蛋白的濃度下降，細胞因子或重組蛋白的總活性則大為減弱。
第4步：如要長期保存，則需用含載體蛋白(如0.1% BSA，或10% FBS，或5% HSA)的溶液進一步稀釋，然后分裝凍存于-20℃至-80℃。
如果一個實驗周期長于一周，或配制的細胞因子或重組蛋白一次用不完，我們就需對細胞因子或重組蛋白進行長期保存。方法是：將已重懸的細胞因子或蛋白用含載體蛋白，如0.1% BSA(牛血清白蛋白)，10% FBS(胎牛血清)，5% HSA(人血清白蛋白)的溶液將重懸液進一步稀釋，然后分裝凍存于-20℃至-80℃，即常規(guī)冰箱的冷凍室或超低溫冰箱中。
在分裝凍存前，一定要用含載體蛋白的溶液將重懸液進一步稀釋。稀釋后的細胞因子或重組蛋白可為任意濃度，因大量的載體蛋白可以保證低濃度細胞因子或重組蛋白仍然維持較高的穩(wěn)定性。
即在做無血清培養(yǎng)或動物的體內(nèi)實驗時，細胞因子中不能含有BSA，F(xiàn)BS或HSA等動物或人的蛋白，要想長期保存細胞因子或重組蛋白則可用海藻糖(Trehalose)作為載體，用含海藻糖的溶液來稀釋已重懸的細胞因子或重組蛋白，然后分裝凍存。
